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大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒實驗使用說明書
BS-2889大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒
一、試劑盒組成與保存條件
大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒通常包含以下主要組分：
預(yù)包被微孔板(8×12 strips或8×6)
TGF-β2標準品(凍干粉，通常濃度為10,000pg/mL)
生物素標記的檢測抗體(120μL/70μL)
HRP標記鏈霉親和素(120μL/70μL)
TMB顯色液(10mL/6mL)
終止液(2M H?SO?，10mL/6mL)
洗滌緩沖液(20×濃縮液)
樣本稀釋液
標準品稀釋液
保存條件：未拆封試劑盒應(yīng)4℃保存;拆封后，標準品需-20℃保存，其他組分4℃保存?
二、實驗前準備
1. 樣本處理
血清?：室溫血液自然凝固10-20分鐘，2000-3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，仔細收集上清，如出現(xiàn)沉淀應(yīng)再次離心?
血漿?：選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后離心(2000-3000轉(zhuǎn)/分，20分鐘)，收集上清?
細胞培養(yǎng)上清?：離心去除顆粒后分裝保存于-80℃，避免反復(fù)凍融?
組織勻漿?：按重量體積比1:9加入PBS勻漿，離心后取上清?
2. 試劑平衡
所有試劑及樣本需室溫(18-25℃)平衡30分鐘，避免37℃直接溶解?
3. 標準品配制
復(fù)溶標準品后，用稀釋液梯度稀釋至5,000pg/mL→78pg/mL(7個濃度點)，0pg/mL為空白對照?
三、實驗步驟(雙抗體夾心法)
加樣?：每孔加入100μL標準品或樣本，37℃孵育90分鐘?
洗滌?：棄液后用PBST洗滌液洗板5次，每次拍干?
加檢測抗體?：每孔加100μL生物素化抗體(1:100稀釋)，37℃孵育60分鐘?
加酶結(jié)合物?：加入HRP標記鏈霉親和素(1:100稀釋)，37℃避光孵育30分鐘?
顯色?：加TMB顯色液100μL/孔，避光反應(yīng)15-20分鐘(顯藍色)?
終止與讀數(shù)?：加50μL終止液(變黃色)，10分鐘內(nèi)在450nm波長測OD值(參考波長570-630nm)?
四、數(shù)據(jù)分析
標準曲線繪制?：以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，擬合四參數(shù)邏輯曲線(R2>0.99)?
樣本濃度計算?：根據(jù)樣本OD值從曲線反推濃度，超出范圍需稀釋后重測?
質(zhì)量控制?：批內(nèi)CV應(yīng)<10%，批間CV<12%?
五、注意事項
安全防護?：
避免直接接觸終止液和底物A、B，一旦接觸盡快用水沖洗?
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品?
禁止用嘴吸取試劑盒任何成分?
操作要點?：
試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫?
實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋密封保存?
避免細菌污染、反復(fù)凍融或劇烈震蕩?
一次加樣時間控制在10分鐘內(nèi)，樣本多時推薦使用多道移液器?
干擾因素?：
不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制HRP活性?
避免溶血或脂血樣本影響檢測結(jié)果?
結(jié)果判讀?：
反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強?
陰性反應(yīng)為無色或極淺，可用"+"、"-"號表示?
也可測OD值：若大于陰性對照OD值的2.1倍即為陽性?
六、技術(shù)參數(shù)
靈敏度?：通常
注：以上資料僅供參考，具體請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。
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